模式動物制備

模式動物制備和銷售

華聯(lián)科模型動物研究院始終專注于模式動物的基因編輯與模型研發(fā)，擁高專業(yè)的項目設(shè)計團(tuán)隊以及經(jīng)驗豐富 、受過嚴(yán)格專業(yè)培訓(xùn) 的實驗技術(shù)隊伍，建立了穩(wěn)定而高效的基因工程小鼠研發(fā)服務(wù)平臺，致力于提供最高標(biāo)準(zhǔn)的基因修飾模型解決方案 。華聯(lián)科模型動物研究院提供組織細(xì)胞特異性誘導(dǎo)表達(dá)的基因敲入 、全敲除及條件性基因敲除小鼠模型構(gòu)建、小鼠精子胚胎冷凍保存復(fù)蘇等技術(shù)服務(wù)。服務(wù)范圍涵蓋國內(nèi)大多數(shù)生物醫(yī)藥企業(yè) 、院校、科研及醫(yī)療機(jī)構(gòu)。

轉(zhuǎn)基因小鼠制備

由客戶提供轉(zhuǎn)墓因質(zhì)粒圖譜、質(zhì)粒DNA及真相關(guān)序列信息，研究院負(fù)責(zé)質(zhì)粒鑒定、酶切線性化DNA制備、小鼠受精卵顯微注射 、注射受精卵移植 、移植小鼠孕期觀察飼養(yǎng)、新生小鼠出生記錄及生命維持 、編號及鼠尾基因組DNA抽握、轉(zhuǎn)基因陽性小鼠的PCR鑒定等。

技術(shù)指標(biāo)：顯微注射用受精卵采自C57BL/ 6J（♀）與CBA（♂）的Fl代；胚胎移植（受精卵輸卵筐移植）受體采用ICR代假孕母鼠；受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養(yǎng)環(huán)境；獲得轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒六個月內(nèi)提供3只以上鼠齡4-6周的轉(zhuǎn)基因陽性小鼠（雜合子Funder），雌雄不限。 

全基因敲除小鼠模型制備

根據(jù)客戶的需求進(jìn)行打靶載體構(gòu)建，由客戶提供目標(biāo)基因的Ensembl序列號，并提出擬剔除區(qū)域；研究院科研人員設(shè)計打靶策略，并反饋客戶，經(jīng)客戶確認(rèn)后進(jìn)行打靶載體的構(gòu)建及后續(xù)研發(fā)。研究院承諾提供3只以上陽性小鼠。

技術(shù)指標(biāo)：顯微注射用受精卵采自C57BL/ 6J（♀）與CBA（♂）的Fl代；胚胎移植（受精卵輸卵筐移植）受體采用ICR代假孕母鼠；受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養(yǎng)環(huán)境；陽性小鼠需通過測序證實待敲基因的序列。

條件性基因敲除或敲入小鼠模型制備

根據(jù)客戶的需求進(jìn)行打靶載體構(gòu)建，由客戶提供目標(biāo)基因的Ensembl序列號，并提出擬剔除（或敲入） 區(qū)域；研究院科研人員根據(jù)客戶的需求確定flox或敲入片段插入的區(qū)域，經(jīng)認(rèn)可后研究院科研人員設(shè)計打靶策略，并反饋客戶，經(jīng)害戶確認(rèn)后進(jìn)行打靶載體的構(gòu)建及后續(xù)研發(fā)。研究院承諾提供3只以上陽性小鼠。

技術(shù)指標(biāo)：顯微注射用受精卵采自C57BL/6J（♀）與CBA（♂）的Fl代 ；胚胎移植（受精卵輸卵雷移植）受體采用ICR代假孕母鼠；受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養(yǎng)環(huán)境。對于基因敲入、flox小鼠各階段均需通過測序證實敲入基因的存在和序列正確。

原核/胞質(zhì)注射

原核

原核/胞質(zhì)注射可以用于對mRNA、普通小片段及大片段DNA、BAC(Bacterial Artificial Chromosome，細(xì)菌人工染色體）進(jìn)行注射、以及相關(guān)DNA混合共注射。

囊胚注射

囊胚注射是用于對已打靶好的ES細(xì)胞進(jìn)行囊胚注射，目的是為了得到嵌合率較高的小鼠，而且要求被注射進(jìn)入的ES細(xì)胞能發(fā)育成生殖細(xì)胞。

由客戶提供待注射物品，研究院負(fù)責(zé)小鼠胚胎的顯微注射、胚胎移植、移植小鼠孕期觀察飼養(yǎng)、嵌合體小鼠出生記錄、生命維持等。

技術(shù)指標(biāo)：顯微注射用胚胎取自C57BL/6J或ICR（由客戶選擇）；胚胎移植（受精卵子宮內(nèi)移植）受體采用ICR代假孕母鼠；胚胎供體受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養(yǎng)環(huán)境。

凈化

外來的小鼠進(jìn)入本中心前需進(jìn)行隔離檢疫，報告顯示有污染的動物進(jìn)入SPF級設(shè)施需要通過生物凈化，以防止未知的微生物、病原體及小鼠傳染病所帶來的風(fēng)險。

供鼠要求：

1.健康雄鼠1-2只，3-6 月齡（超齡可以嘗試），品系背景明確。我們可提供提供野生型小鼠凈化。
2.健康雄鼠1-2只，3-6 月齡（超齡可以嘗試），同品系雌鼠4-8周齡，5只以上。

擴(kuò)繁

優(yōu)點：

1.體外受精技術(shù)相當(dāng)于雄鼠和大量的雌鼠在體外同時交配，這保證了出生小鼠周齡的一致性，降低了由于小鼠周齡差異導(dǎo)致的實驗誤差，實驗數(shù)據(jù)更可靠。

優(yōu)點：

1.由于移植的ICR受體都是SPF級別，所以出生的小仔相當(dāng)于做了一次凈化，新生小鼠的身體素質(zhì)超贊。

保種

模型小鼠胚胎凍存保種

由客戶提供轉(zhuǎn)基因或基因敲除雄鼠，研究院負(fù)責(zé)將該小鼠與超排的C57BL/6J交配，取桑惺胚階段的胚胎，并采用玻璃化冷凍的方法進(jìn)行胚胎凍存，保存在液氮中。

客戶提供5-10只6-8周齡雄鼠（轉(zhuǎn)基因陽性鼠或基因敲除雜臺子／純臺子雄鼠），并提供基因修飾鼠基因型鑒定的引物及條件；研究院負(fù)責(zé)小鼠基因型復(fù)檢（PCR方法），將超排后的4-6周齡C57BL/6J雌鼠與基因修飾雄鼠交配，取桑惺胚階段的胚胎，每個國系凍存200枚桑惺胚階段的胚胎。

小鼠胚胎操作及品系建立

本研究院還可進(jìn)行小鼠卵子、精子和胚胎的采集、凍存和復(fù)蘇；并可進(jìn)行體外受精、顯微受精、克隆、胚胎生物凈化、小鼠嵌合胚胎的制備和四倍體胚胎拯救等技術(shù)服務(wù)。收費標(biāo)準(zhǔn)視具體情況而定。

凍存小鼠胚胎復(fù)蘇繁殖

冷凍保存的胚胎由害戶運至研究院（液氮中運輸），研究院按照客戶提供的凍存及復(fù)蘇方法，復(fù)蘇胚胎，并將胚胎移植到假孕母鼠體內(nèi)（輸卵雷移植或子宮移植），仔鼠出生記錄及基因型鑒定等。

技術(shù)指標(biāo)：胚胎復(fù)蘇并將胚胎移植到假孕母鼠ICR的子富（每側(cè)移植6枚囊胚）內(nèi)，受體鼠及新生鼠均維持在SPF級小鼠飼養(yǎng)環(huán)境中。研究院保存的胚胎復(fù)蘇后，提供5只以上SPF級轉(zhuǎn)基因陽性鼠或基因剔除雜合子小鼠，雌雄不限；客戶提供的冷凍胚胎復(fù)蘇移植后，所高出生的仔鼠均提供給客戶。

模式動物定制流程

常用轉(zhuǎn)基因及基因剔除小鼠目錄