組織免疫熒光（IF）---雙標(biāo)

實驗原理
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，熒光素受激發(fā)光的照射，由低能態(tài)進(jìn)入高能態(tài)，而高能態(tài)的電子是不穩(wěn)定的，以輻射光量子的形式釋放能量后，再回到原來的低能態(tài)，這時發(fā)出明亮的熒光，利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。免疫熒光技術(shù)分直接法、間接法和補(bǔ)體法，最常見的為間接法。

實驗步驟
（1）石蠟切片脫蠟至水，或者制作的冰凍切片用冷丙酮在4℃固定10－20分鐘；
（2）抗原修復(fù)，冰凍切片無需修復(fù)；
（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；
（4）滴加正常的血清室溫封閉30 min；
（5）加未標(biāo)記的特異性抗體，4℃過夜；
（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震蕩漂洗）；
（7）加熒光標(biāo)記的二抗抗體，37℃濕盒避光作用30 min；
（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；
（9）甘油緩沖液封片；
（10）熒光顯微鏡觀察。
 

注意事項

1.需要使用不同來源的一抗

2.熒光有衰減，寄回或者重拍都可能有熒光消失的現(xiàn)象，建議客戶在下單時增加拍照張數(shù)。

3.做石蠟包埋樣本保存及運(yùn)輸：常溫置于4%多聚甲醛固定液內(nèi)保存及運(yùn)輸（需注意固定液的量最好是組織的10倍以上，樣本需完全浸泡于固定液內(nèi)并防止樣本貼壁固定不良，大標(biāo)本最好使用大的標(biāo)本瓶/袋運(yùn)輸，建議在大標(biāo)本上按取材包埋要求做多條平行切口，以防標(biāo)本中心固定不透徹。運(yùn)輸過程中防止固定液滲漏）。
4.做冰凍切片樣本保存及運(yùn)輸：-80℃或液氮長期保存，干冰運(yùn)輸。

實驗結(jié)果展示

 
 
技術(shù)服務(wù)與咨詢：027-87735083