組織免疫熒光(IF)---單標(biāo)

實(shí)驗(yàn)原理
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素,熒光素受激發(fā)光的照射,由低能態(tài)進(jìn)入高能態(tài),而高能態(tài)的電子是不穩(wěn)定的,以輻射光量子的形式釋放能量后,再回到原來的低能態(tài),這時發(fā)出明亮的熒光,利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。免疫熒光技術(shù)分直接法、間接法和補(bǔ)體法,最常見的為間接法。

實(shí)驗(yàn)步驟
(1)石蠟切片脫蠟至水,或者制作的冰凍切片用冷丙酮在4℃固定10-20分鐘;
(2)抗原修復(fù),冰凍切片無需修復(fù);
(3)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min;
(4)滴加正常的血清室溫封閉30 min;
(5)加未標(biāo)記的特異性抗體,4℃過夜;
(6)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min(震蕩漂洗);
(7)加熒光標(biāo)記的二抗抗體,37℃濕盒避光作用30 min;
(8) 0.01M PBST避光漂洗3次,每次5 min;
(9)甘油緩沖液封片;
(10)熒光顯微鏡觀察。

樣本要求及檢測周期


實(shí)物數(shù)據(jù)信息實(shí)驗(yàn)周期
客戶提供固體組織組織部位、拍照倍數(shù)及要求≤24樣本,10工作日
我們提供剩余物品實(shí)驗(yàn)報告、結(jié)果圖片24-40樣本,15工作日

注意事項

1.熒光有衰減,寄回或者重拍都可能有熒光消失的現(xiàn)象,建議客戶在下單時增加拍照張數(shù)。
2.做石蠟包埋樣本保存及運(yùn)輸:常溫置于4%多聚甲醛固定液內(nèi)保存及運(yùn)輸(需注意固定液的量最好是組織的10倍以上,樣本需完全浸泡于固定液內(nèi)并防止樣本貼壁固定不良,大標(biāo)本最好使用大的標(biāo)本瓶/袋運(yùn)輸,建議在大標(biāo)本上按取材包埋要求做多條平行切口,以防標(biāo)本中心固定不透徹。運(yùn)輸過程中防止固定液滲漏)。
3.做冰凍切片樣本保存及運(yùn)輸:-80℃或液氮長期保存,干冰運(yùn)輸。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示

肺組織免疫熒光單標(biāo)100倍紅色-1   

技術(shù)服務(wù)與咨詢:027-87735083